超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)_Intracellular signaling

Intracellular signaling assays:






  • GPCR-ligand binding proteins
  • Phosphoproteins
  • Ubiquitinated Proteins







    • 資料來源: Meso Scale Discovery 原廠網站
                      第三代免疫分析技術 殷彥
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    超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)

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    次世代免疫分析技術 概論: 電化學發光  (Electrochemiluminescence )  是繼放射免疫、酵素免疫、螢光免疫、化學發光免疫測定之後的新一代標記免疫測定技術。電化學發光法源於電化學法和化學發光法，是一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，包括了電化學和化學發光二個過程。電化學發光  (Electrochemiluminescence )  可以應用於所有的免疫測定，電化學發光能取代第一代放射免疫的靈敏度，又繼承了第二代酵素結合免疫吸附的通量方便，因而廣泛被全球大量藥廠及CRO公司所認可和使用，從此被載入了免疫分析技術發展的歷史中。 電化學發光原理: 包含: 電化學反應過程、化學發光過程及迴圈放大過程 電化學反應過程：在工作電極上 ( 陽極 ) 施加一定的電壓能量作用下，二價的三氯聯吡啶釕  [Ru(bpy)3]2+  釋放電子發生氧化反應而成為三價的三氯聯吡啶釕  [Ru(bpy)  3  ]  3+   ，同時，電極表面的 TPA 也釋放電子發生氧化反應而成為陽離子自由基  TPA+  ，並迅速自發脫去一個質子而形成三丙胺自由基  TPA· ，這樣，在反應體系中就存在具有強氧化性的三價的三氯聯吡啶釕  [Ru(bpy)  3  ]  3+   和具有強還原性的三丙胺自由基  TPA· 。 化學發光過程：具有強氧化性的三價的三氯聯吡啶釕  [Ru(bpy)  3  ]  3+   和具有強還原性的三丙胺自由基  TPA·  發生氧化還原反應，結果使三價的三氯聯吡啶釕  [Ru(bpy)3]3+  還原成激發態的二價的三氯聯吡啶釕  [Ru(bpy)  3  ] 2+   ，其能量來源於三價的三氯聯吡啶釕  [Ru(bpy)  3  ]  3+   與三丙胺自由基  TPA·  之間的電勢差，激發態  [Ru(b...
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    可DIY專屬於你的多因子偵測試劑組!! 生命科學的研究越來越多樣性越複雜，需要同時觀察、偵測和分析許多不同的生物標誌物彼此消長與影響；市面上的產品漸漸的不符合需求，所以可客製化的多因子偵測平台變成一種新的趨勢。MSD超靈敏電化學發光免疫分析技術平台，因此，提供了可完全客製化的U-plex產品線，最近更開發了方便使用者作實驗的R-Plex antibody parie產品，讓使用者可以搭配已商業化的生物標誌產品，加上創新的客製化生物指標，得到高靈敏、可信賴且獨一無二的數據。 U-PLEX: 1. 快速輕鬆地設計和構建客製化的多因子試劑組 2. 從預選配置並使用自己的抗體或選擇已商業化抗體產品 3. 簡單實驗流程，流程類似於 ELISA; 無需額外晶片點樣機器 4. 相容所有 MSD 儀器（ S600 ， Quickplex SQ 120 等）和軟體 5. 開放平臺 : 相容抗體、蛋白質、多肽、碳水化合物、核酸、寡核苷酸 6. 優秀的 MSD 技術性能 : 高靈敏度、穩定的再現性 , 和寬廣的動態範圍 R-PLEX:  1.    市場上唯一經過血清、血漿測試驗證的抗體對產品，無需擔心血清 / 血漿基質效應干擾 2.    經過單因子驗證，使用者也可配套 U-plex 多因子試劑組使用 3.    擁有了 MSD 多因子檢測的高靈敏度與寬線性範圍特點 4.    研究領域涉及：發炎、癌症、免疫、代謝、肥胖、細胞信號傳遞與神經退行性疾病 資料來源 :  Meso Scale Discovery  原廠網站                    第三代免疫分析技術   殷彥                    騰達行企業股份有限公司
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    超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)_Immunogenicity_2

    免疫原性重要嗎? 用一個故事告訴您! 2016年三月Pfizer藥廠於免疫風濕疾病專門期刊A nnals of the Rheumatic Diseases投稿一篇名為 Comparing the immunogenicity of the  etanercept biosimilar SB4 with the innovator  etanercept: another consideration的文章，文中討論Samsung Bioepis藥廠所生產的蛋白質藥SB4 (Pfizer治療類風濕關節炎用藥etanercept的生物相似藥)第三期臨床結果之可議性； Samsung Bioepis藥廠在第三期臨床結果報告中指出SB4的免疫原性比原用藥 etanercept低(在用藥第24週後，使用SB4產生抗藥性抗體的病人比例有0.7%；使用 etanercept 產生抗藥性抗體的病人比例有13.1%)，暗示SB4在用藥安全上是乎比 原用藥 etanercept安全；所以， Pfizer在其 投稿的文章中直接指出 Samsung Bioepis藥廠所作的 免疫原性評估方法可能因較低的藥物兼容性而導致偵測方法靈敏度不足而無法偵測到抗藥抗體，所以懷疑其結果。然而， Samsung Bioepis藥廠也於同年五月在相同期刊回覆一篇 文章明確針對 Pfizer藥廠的懷疑 說明，文中清楚明白的指出 Samsung Bioepis藥廠臨床三期 免疫原性評估方法 所使用的分析平台是目前各大藥廠普遍使用的MSD 超靈敏電化學發光免疫分析技術，沒有任何可議之處，其結果值得信任，直接反擊 Pfizer藥廠為自己說明 。 目前生物相似藥正進入百家爭鳴的時代，既然療效相似，剩下的就是比價格、開發時間與安全性， MSD 超靈敏電化學發光免疫分析技術是目前各大藥廠及CRO公司所使用的技術平台，可以提供一個大家都認可的實驗結果與時效性，提供生物相似藥臨床實驗完整的應用。 資料來源 : 1. Marshall  L ,  Hickling  T ,  Bill  D , et al  Comparing the immunogenicity of the     ...
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    超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)_LRRK2 (PD)

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    帕金森氏症關鍵蛋白質LRRK2致病機制!! 根據先前研究，L eucine-rich-repeat kinase 2 ( LRRK2)蛋白質的變異在遺傳性帕金森氏症中扮演關鍵角色；LRRK2蛋白質屬於ROCO protein family的一員，包括與受體的結合、磷酸激酶，以及GTP酶等功能，其中GTP酶的活性與LRRK2的單體及雙聚體的平衡息息相關，至於如何調控單體和雙聚體的機制則尚未清楚；但最近比利時布魯塞爾自由大學的研究團隊提出了一個可能的調控機制，發表在Nature Communications期刊，此調控機致大致如下: 當GTP結合LRRK2雙聚體時，會造成雙聚體結構改變趨向單體化而進行GTP的水解成GDP，然而GDP會再驅使單體LRRK2形成雙聚體，造成一個單體-雙聚體的循環；若LRRK2發生突變，導致雙聚體更穩定，雙聚體的單體化會受到影響，而降低GTP水解速度，因此對遺傳性帕金森氏症造成影響。超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)平台，最近發表了R-PLEX Human LRRK2 及LRRK2 pS935 antibody set，搭配U-PLEX提供一個高靈敏度與寬偵測範圍的分析平台。                             R-PLEX Human LRRK2 Antibody Set Calibration Curve 原文聯結 資料來源 :   Meso Scale Discovery  原廠網站                    第三代免疫分析技術   殷彥                    騰達行企業股份有限公司
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    新檢驗技術避免乳腺癌 “ 過度診斷 ” ！ Provista Diagnostics 分子診斷公司在 C linical Breast Cancer 期刊中發表了 利用 MSD 平台應用於協助臨床醫生在乳腺癌患者完成乳腺 X 光檢測或其他乳房手術後做出更好的治療決策的文獻。 文章的主要作者  Judith Wolf 博士表示，美國每年大約都會有 160 萬人次的乳腺檢測， 而基於血液檢查的診斷技術可以幫助臨床醫生實現對乳腺癌的非侵入性精准診斷，避免潛在的不必要檢測  ( 約減少 67% 的不必要檢測 ) 。 研究共同作者 Avera McKennan 醫院乳腺放射診斷專家 Josie Alpers 博士指出，當乳房 X 光檢查產生異常結果時，每位臨床醫生都需要對病人是否需要進一步檢查做出判斷； 而乳腺癌非侵入性血液檢測技術正意味著臨床醫生有一種新的方法來準確識別哪些患者可能需要或可能不需要額外的附加診斷。 Provista Diagnostics 的乳腺癌非侵入性血液檢測技術 Videssa Breast 目前已經在兩項隨機試驗中取得了優異成績， 在 1350 例 25 至 75 歲的乳腺癌患者中，該技術可以對病人血清蛋白生物標誌物和腫瘤相關蛋白做出精准檢測； 研究人員對他們的發現感到興奮，並對使用非侵入性血液檢測技術的未來持樂觀態度。 本文中血液學指標、腫瘤相關自身抗體均採用 MSD 多因子超靈敏電化學發光免疫分析技術檢測。 原文聯結 資料來源 :    Meso Scale Discovery  原廠網站                      Provista Diagnostics 網站                      第三代免疫分析技術   殷彥                       騰達行企業股份有限公司 ...
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    超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)_T1D

    MSD超靈敏電化學免疫發光技術預測第1型糖尿病風險 MSD超靈敏 電化學發光免疫分析技術 適合開發高靈敏度的多因子偵測，在自身抗體檢測方法中能檢測到弱親和力的自身抗體，從而更早預測疾病。 邁阿密大學米勒醫學院研究員利用 MSD  超靈敏電化學發光免疫分析技術 分析顯示增加自身抗體檢測而提高預測第1型糖尿病（ type 1 diabetes； T1D）。 因此，研究了 第1型糖尿病 患者的親屬，以確定MSD超靈敏電化學發光免疫分析技術測定是否可用於改善針對單GADA陽性個體或單mIAA自身抗體個體的第一型糖尿病風險評估。 應用實例:  邁阿密大學米勒醫學院應用MSD超靈敏電化學發光免疫技術預測第1型糖尿病風險 資料來源:  Meso Scale Discovery 原廠網站                    第三代免疫分析技術 殷彥                    騰達行企業股份有限公司
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    超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)_組織均質液樣品

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    組織勻質液樣品，如使用 Western Blot 、 ELISA 容易出現以下問題： （ 1 ）樣本用量較大，珍貴樣品用量不足。 （ 2 ） 樣品基質複雜，容易導致實驗結果差異大；尤其是 WB 再現性差， CV 差異遠大於           20% ，往往要做一份樣品要測 3 重複。 （ 3 ）一些高含量的蛋白質，超過 WB/ELISA 偵測上限，訊號過強，需要重新測試實驗條件。 （ 4 ）一些低含量的蛋白質，低於 WB/ELISA 偵測下限，檢測不到，無計可施。 （ 5 ） WB 時間長，步驟多，常見問題和常見解決方案多，遇到問題，解決起來繁瑣耗時。 相對的，若使用MSD 超靈敏電化學發光免疫分析技術 系統可克服上述 問題： （ 1 ） 10 - 20% 的樣品用量。 （ 2 ） CV 在 20%  以內，一份樣品重複 2 次，或者不重複也可。 （ 3 ） MSD （ Meso Scale Discovery ）偵測範圍廣，容易一次性檢測出不同含量的蛋白質。 （ 5 ）多篇 SCI 文獻報導 MSD （ Meso Scale Discovery ）和 WB 的資料趨勢一致，而且有           更高的樣品檢出率。 （ 6 ） AKT, MAPK,  細胞凋亡， EGFR  等訊息傳導可使用一個試劑盒檢測。 ( 點擊連 結，可查看試劑組清 單） （ 7 ） 組織勻質液樣品的處理， MSD 建議如下： Tissue Homogenates with MSD Assays This is a very general protocol for tissue homogenates that has worked well on ourplatform. The tissue pulverization technique described below is a sonicator butyou can use a tissue grinder or an alternate tool.  Some scientists use...
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    超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)_Biosimilar

    潛力很大的生物相似性藥物?! 何謂生物相似性藥物? 根據衛生福利部食品藥物署2015年公告的 生物相似性藥品查驗登記基準的定義: 以生物技術衍生之生物藥品，於品質、安全及療效上與獲得我國核准之原開發廠生物藥品 ( 參考品， reference drug) 相似，範圍，包含 : 重組胜肽、重組蛋白質；但不包含 : 疫苗、致敏原、血液及血漿衍生製劑及其重組替代物，以及如基因或細胞治療產品等。 由  IMS Health 資料顯示， 2011 年全球生技藥品市場約 1,570 億美元，占整體藥品市場的 16.4% ，預測 2016 年生技藥品市場將超過 2,000 億美元； 2011 年全球生物相似性藥品市 場約 6.9 億美元，估計 2016 年將成長至 20-40 億美元；隨著生技藥品市場的成長， 生物相似性藥物的成長也必然可期。 生物藥品不像小分子藥物般分子量小、結構簡單，可以達到化學物理性質完全一樣 (identical)； 生物相似性藥分子量大及結構複雜，無法達到與參考藥品 化學物理性質完全一樣， 而是要證明它與參考藥品有多相似，且不相似處是否有臨床上的意義； 其中 安全性的評估，就成為重要的關鍵指標。就 安全性的評估 有兩大特殊需求 : 第一、藥物安全監視計畫及風險管理計畫；第二、 免疫原性之偵測 ，因為安全結果無法利用動物實驗中預知，且不同適應症有不同風險，只能透過臨床實驗及安全監視來驗證；在 生物相似性藥品查驗登記基準中也有明確指出分析方法需隨現今分析技術科技的進展，選擇適當靈敏度的分析平台，著眼於此， MSD 超靈敏電化學發光免疫分析技術 是符合目前、甚至未來10年需求的分析技術，也難怪世界各大藥廠及生技公司都以此平台研究開發相關產品或偵測平台。 資料來源 :   Meso Scale Discovery  原廠網站                    第三代免疫分析技術   殷彥                     生物相似性藥品查驗登記基準 ( FDA 藥字第...
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    超靈敏電化學發光免疫分析技術 Electrochemiluminescence (ECL)_Plate Technology

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    石墨電極微孔盤（ MSD 獨家專利）可包覆：懸浮細胞、貼壁細胞、抗體、蛋白質、多肽、病毒顆粒及細胞膜類似物等。 可應用於： (1)  生物標誌物偵測（細胞因子、分泌型蛋白質與細胞內磷酸化蛋白質） (2)  生物藥藥物代謝與免疫原性 (3)  生物藥物的高通量篩選 :  Cell Based Assay 、 Epitope Binning Assays 、 solution       equilibrium  kinetic exclusion KD measurement (MSD-SET) (4)  生物藥物品質管控： Lingand binding Assay 、  CHO 宿主細胞殘留、生物活性 (5)  小分子藥物的高通量篩選： Cell Based Assay (6)  疫苗的血清學免疫原性檢測：自行開發多因子檢測，單個樣品同時檢測 10 種免疫原性，節        約 80% 的時間。 (7)  自身抗體檢測：過敏、病毒與中和抗體 … 等。 MSD  多重偵測矩陣石墨電極微孔盤設計 在一個微孔內有不同的多重偵測矩陣，且有 96 孔及 384 孔石墨電極微孔盤可供選擇。 MSD 提供 2 種不同表面材質 石墨電極微孔盤 微孔盤 : Standard Plate:  疏水性材質 High Bind Plate:  親水性材質 微盤工作電極尺寸和表面材質決定了生物物質可包覆量的多寡: 石墨電極微孔盤包覆固定流程 : 由於微孔盤特殊石墨表面，可包覆 懸浮細胞、貼壁細胞、抗體、蛋白質、多肽、病毒顆粒及細胞膜類似物 … 等斗可直接包覆固定在高結合能力的微孔盤上。包覆固定流程，如下 : (1) Solution Coating:  和傳統 ELISA 包覆流程類似 (2) Spot Coating:  只將生物物質包付固定於工作電極上，大幅降低包覆使用體積 ...
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